Хроматография

Стационарная фаза для ВЭЖХ

ASTRA - CHROMSERVIS

ARION - CHROMSERVIS

На нашем веб-сайте вы также найдете инструкции по уходу за колонками (U)ВЭЖХ Arion.

CHROMSHELL - CHROMSERVIS

КИНЕТЕКС - ФЕНОМЕНЕКС

*Колонки обладают стабильностью в диапазоне pH от 1,5 до 10 в изократических условиях. В градиентных элюциях их стабильность находится в диапазоне рН от 1,5 до 8,5.

Колонки Kinetex 2,6 мкм с внутренним диаметром 2,1 мм стабильны до давления 1000 бар, в противном случае — до 600 бар.

Попробуйте колонки ChromShell, которыми вы можете заменить колонки Kinetex.

ЛУНА – ФЕНОМЕНЕКС

БЛИЗНЕЦЫ – ФЕНОМЕН

СИНЕРГИЯ – ФЕНОМЕН

ОНИКС – ФЕНОМЕНЕКС

ЮПИТЕР – ФЕНОМЕН

ГрейсСмарт - ГРАЦИЯ

Alltech ^® Prevail - ГРАЦИЯ

Капиллярные/наноколонки для ЖХ ProteCol - SGE

HOW TO CORRECTLY CRIMP VIALS

Обжимные флаконы являются отличными контейнерами для образцов для автоматических дозаторов газовых и жидкостных хроматографов, а также для хранения образцов или калибровочных растворов. Техника их закрытия очень важна для правильной герметичности. Из-за утечки, вызванной неправильной герметизацией, может произойти испарение растворителя или потеря аналитов.
Правильно закрытый флакон можно узнать по тому, что его крышка после закрытия вращается с трудом, а перегородка прямая.
Флакон, закрывающийся с чрезмерным усилием, можно узнать по тому, что его крышка обычно вообще не поворачивается и, кроме того, он имеет загнутую перегородку (внутрь). Если перегородка будет проколота иглой микрошприца, перегородка окажется под сильным напряжением и, таким образом, герметичность флакона будет нарушена.
Флакон, не имеющий правильно закрытой крышки из-за малой мощности обжимных клещей, проявляется легким вращением крышки и, в некоторых случаях, отстегиванием алюминиевого материала вокруг нижнего края горлышка флакона.
Вы можете установить правильное усилие закрывающих клещей.
В некоторых случаях регулировка силы осуществляется поворотом шестигранного ключа внутри губок. Плоскогубцы также имеют стопорный винт, который устанавливает безопасное расстояние, чтобы предотвратить их использование.
силы, которые слишком велики и, таким образом, приводят к утечке или даже механическому повреждению флакона.

Введение

Аминокислоты являются ключевыми строительными блоками жизни и играют ключевую роль в различных метаболических путях. В основном они действуют как промежуточные соединения, часто не задействуя напрямую белки. Из-за их химической сложности и динамического диапазона их надежный количественный и качественный анализ в биологических жидкостях и тканях имеет решающее значение для получения информации о питании, идентификации соединений и диагностики.

С этой целью был разработан простой, элегантный и на сегодняшний день самый быстрый метод анализа незаменимых аминокислот. Набор Metamino® на основе ЖХ/ГХ-МС предлагает комплексное решение до 75 метаболитов, включая основные протеиногенные аминокислоты, биогенные амины и коферменты, с возможностью дальнейшего расширения аналитов.

Данные масс-хроматограммы

Гигант. 1: Масс-хроматограмма внутренних стандартов SD1 и SD2. Разделение 5 нмоль аминокислот с помощью LC-MS Metamino®

Гигант. 2: Масс-хроматограмма реального образца: Разделение аминокислот в формуле пива Budvar 12˚ (25 мкл образца было нанесено на колонку). Высокая эффективность и высокое разрешение нашей колонки способствуют хорошему разделению пиков. Образец протестирован с помощью LC-MS Metamino®

Гигант. 3: Масс-хроматограмма реального образца: разделение аминокислот, присутствующих в сыворотке крови (25 мкл осажденной сыворотки наносили на колонку). Высокая эффективность и высокое разрешение нашей колонки способствуют хорошему разделению пиков. Образец протестирован с помощью LC-MS Metamino®

Базовые приготовления

После извлечения содержимого из матрицы можно приступить к подготовке проб для анализа ЖХ-МС/ГХ-МС.

Этот протокол лишь кратко описывает процедуру подготовки проб. Подробную процедуру можно найти в руководстве пользователя Metamino^®.

Анализ ЖХ-МС происходит следующим образом:

1. Отнесите пипеткой 100 мкл извлеченного содержимого (сыворотки, плазмы и т. д.) и добавьте 100 мкл среды осаждения. Центрифуга в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
2. Отнесите пипеткой 25 мкл осажденного образца и добавьте 10 мкл раствора внутреннего стандарта в каждый флакон для подготовки проб.
3. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
4. Внесите пипеткой 10 мкл раствора реагента в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Разрешить дериватизации продолжаться в течение по крайней мере 2-3 минут.
5. Активируйте и уравновесьте сорбент в микроспиновом фильтре добавлением:
   1. 200 мкл среды активации MSPE, затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
   2. 200 мкл уравновешивающей сорбентной среды MSPE, затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
6. Вылейте элюат через мембрану.
7. Разбавьте реакционную смесь дериватизации 400 мкл среды для разбавления и промывки и перемешайте на вортексе в течение 5-10 секунд.
8. Разбавленную реакционную смесь (обычно 450-500 мкл) наносят на увлажненный сорбент микроспинового фильтра и оставляют на 1-2 минуты. Центрифуга в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
9. Вылейте элюат через мембрану.
10. Сорбент промывают на микроспиновом фильтре 200 мкл разбавленной и промывной среды и центрифугируют от 30 до 60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
11. Поместите микроспиновый фильтр в новый флакон для центрифуги, добавьте 200 мкл элюирующей среды и центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 г (6000 об/мин).
12. Перенесите элюат во флакон автосамплера. Образец готов к анализу ЖХ-МС.

ГХ-МС анализ происходит следующим образом:

1. Внесите пипеткой 25 мкл целевого образца и 10 мкл раствора внутреннего стандарта в каждую стеклянную реакционную пробирку.
2. Внесите пипеткой по 20 мкл восстановителя в каждую стеклянную реакционную пробирку и кратковременно перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Дайте постоять 1-2 минуты.
3. Внесите пипеткой по 25 мкл исходной среды в каждую реакционную стеклянную пробирку и добавьте 50 мкл раствора реагента (дериватизации) в каждую реакционную стеклянную пробирку и встряхивайте в течение 5–10 секунд.
4. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
5. Внесите пипеткой 25 мкл раствора катализатора в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Дайте постоять 1-2 минуты. Эмульсия постепенно разделяется на два слоя.
6. Внесите пипеткой 50 мкл экстракционной среды в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд.
7. Внесите пипеткой 25 мкл кислой среды в каждый флакон для подготовки проб и перемешайте на вортексе в течение 5–10 секунд. Затем центрифугируйте в течение 30–60 секунд при 1500 g (6000 об/мин).
8. Перенесите органический (верхний) слой (50–100 мкл) во флакон автосамплера с вкладышем. Образец готовят для анализа ГХ-МС.

Содержимое набора

Набор MetAmino ^® содержит все реагенты, среды и химикаты. Содержимое стартового набора указано в таблицах ниже:

Содержимое набора ЖХ-МС на 100 образцов:

Состав набора ГХ-МС на 100 образцов:

Функции

• В принципе подходит для любых матриц (моча, сыворотка крови, слеза, церебральная жидкость, экстракты тканей, экстракты почвы и т.д.)
• Простая подготовка проб
• Дериватизация и анализ образца менее 20 минут
• Широкий портфель аналитов (75) с возможностью дальнейшего расширения.
• Не требуется нагревание/замораживание пробы
• Доступна библиотека NIST для ГХ/МС
• Возможно определение веществ с низкой молекулярной массой, которые могут разлагаться в источнике ионов (например, GLY, ALA и т. д.).
• Подходит для анализа веществ, которые трудно определить количественно, например, полиаминов.
• В комплект входят все необходимые реагенты, аксессуары, колонка для ВЭЖХ и четкие инструкции по дериватизации и анализу с высокой точностью и чувствительностью.

Описание

Наши наборы MetAmino ^® LC-MS и GC-MS обеспечивают быструю, надежную, воспроизводимую и точную процедуру анализа аминокислот, которая включает как подготовку проб, так и хроматографическое разделение.

Метод ЖХ-МС основан на твердофазной микроэкстракции с использованием специальных микроспиновых фильтров ( МСПЭ ) с недавно разработанным сорбентом и встроенной мембраной 0,22 мкм, метод ГХ-МС использует жидкостно-жидкостную микроэкстракцию ( ЖЖМЭ ). для подготовки. После этой предварительной обработки образец анализируют с помощью ЖХ-МС (ГХ-МС). В общей сложности подготовка образца для ЖХ-МС занимает около 8 минут, а анализ образца — 12 минут, поэтому все время эксперимента составляет всего 20 минут. Общее время эксперимента ГХ-МС еще короче – около 17 минут.

Этот уникальный набор отвечает всем лабораторным требованиям и предназначен для всех конечных пользователей, которым нужен простой аналитический метод и высокая эффективность разделения.

Часто задаваемые вопросы о МетАмино

Какой тип мембраны внутри спинового фильтра?

• Мембрана изготовлена из нейлонового материала и имеет пористость 0,22 мкм. Его диаметр оптимизирован для использования с данным спиновым фильтром.

Можно ли расширить набор ^MetAmino® другими аналитами?

• Да, набор ^MetAmino® можно расширить. Свяжитесь с нами для получения подробной информации.

Могу ли я использовать набор ^MetAmino® для анализа мочи?

• Да, набор ^MetAmino® можно использовать для анализа мочи. Образец не должен содержать белков, поэтому перед использованием набора его необходимо обработать обычным способом (центрифугирование, фильтрация).

Можем ли мы заказать реагенты отдельно?

• Да, весь набор реагентов можно заказать под каталожным номером MAK-5857-L002 .

Какое давление во время анализа ЖХ/МС?

• В начале анализа давление 380 бар, в конце 200 бар.

Созданы ли MRM для аминокислот, перечисленных в наборе ^MetAmino®, после или до дериватизации стандартов?

• Переходы MRM для AA, перечисленные в руководстве, указаны как переходы производных AA, а не собственного AA.

Следует ли гидролизовать образец корма перед работой с набором ^MetAmino® ?

• Осаждение с использованием осаждающей среды (PM) не является необходимым шагом для успешной дериватизации образца. Набор тестировался в первую очередь для анализа биожидкостей, часто содержащих пептиды. Для предотвращения их осаждения в процессе дериватизации в протокол пробоподготовки был включен этап осаждения.
• Если требуется общий анализ свободных и связанных с пептидами аминокислот, в этом случае мы рекомендуем провести гидролиз образца, а затем высушить аликвоту гидролизованного образца в токе азота или в спидваке. Растворяют высушенный остаток в 25 мкл деионизированной воды или 0,1 М водного раствора HCl (для лучшей растворимости) и действуют согласно инструкции, добавляя 10 мкл раствора IS.
• Что касается гидролиза пептидов, используемые добавки (фенол, тиодигликоль) в среде гидролиза также могут быть дериватизированы (вероятно, не видны при « полном сканировании »). Поэтому мы рекомендуем 6M HCl в качестве среды гидролиза.

Можем ли мы заказать набор ^MetAmino® GC/MS для подготовки 400 образцов?

• Пока нет, в настоящее время у нас есть только набор ^MetAmino® GC/MS для подготовки 100 образцов. Этот комплект можно заказать под каталожным номером MAK-5857-BA01.

В таблице 78 аминокислот, некоторые из которых отсутствуют в доступных стандартных смесях — так должны ли мы полагаться на переходы MRM и смотреть на время удерживания, или это стандарты, которые мы должны купить, если мы хотим их определить?

• Для количественного определения набор MetAmino содержит - один флакон стандартного раствора SD1, входящего в состав набора, содержит 33 аминокислоты: AAA, ABA, ALA, APA, ARG, ASP, BAIBA, CC, CIT, CTH, GABA, GLU, GLY. , GPR, HIS, HLY, HYP, ILE, LEU, LYS, MET, 1MHIS, 3MHIS, ORN, PHE, PHP, PRO, SAR, SER, THR, TPR, TYR, VAL и SD2 во флаконе с лиофилизированной смесью 3 аминокислот : АСН, ГЛН, ГТО. Однако набор аминокислот может быть дополнительно расширен за счет других соединений, содержащих первичные или вторичные функциональные аминогруппы.
• Массы (m/z), указанные в руководстве, верны и представляют собой ионы M+H+. Массы (m/z) и время удерживания из руководства были получены с помощью прибора с линейной ионной ловушкой LTQ, а данные из Сертификата анализа были получены с прибора Q Exactive plus HRMS. В обоих случаях использовали одну и ту же колонку, скорость потока и состав подвижной фазы. Время удерживания (ВУ) является экспериментальным значением, и расхождения, особенно для соединений с поздним элюированием, могут быть вызваны использованием разных приборов ЖХ/МС.

Обзор сорбентов МСПЭ

Сорбенты для метода МСФЭ выбираются с учетом максимально широкой области применения. MSPE SpeExtra C18 представляет собой гидрофобный тип октадецилсиликагеля со специальным концевым покрытием с очень широким применением. Он подходит для широкого спектра аналитов, показывая худшее удерживание полярных соединений. MSPE SpeExtra C18-P представляет собой полярно модифицированный мономерный октадецилсиликагель. Он предлагает различные типы взаимодействий: диполь-дипольное, π-π и гидрофобное. Поэтому он подходит для ароматических и полярных соединений. Полимерный сорбент MSPE SpeExtra HLB с высокой удельной поверхностью и специальным торцевым покрытием. Он имеет гидрофильную и липофильную модификации, обеспечивающие универсальное применение и более высокую емкость, чем силикагель С18.